评价一个钙探针是否“常用”，需要看亮度，还要同时看文献成熟度、设备兼容性、Ca²⁺亲和力、动态范围、加载方式和是否适合定量。化学染料的优势是加载快、实验门槛低、可选择的Ca²⁺亲和力范围广；化学Ca²⁺指示剂相对基因编码探针的一大优势是实用范围广，操作简便。基因编码探针的优势则是可以通过病毒、转基因或特异启动子实现长期、特定细胞类型、体内成像；目前GECI已广泛用于转基因动物和体内复杂神经网络研究

如果实验目标不是只看Ca²⁺是否升高，而是要比较不同组之间的Ca²⁺浓度变化，尤其是需要校正染料加载量、细胞厚度、光漂白等因素，Fura-2AM仍然是*经典的选择。Fura-2通过340/380nm双激发、约510nm发射进行比率成像。Fura-2是比率型Ca²⁺指示剂，适合低Ca²⁺水平下的**定量。

当需要可靠定量、药理学剂量反应、细胞生理学比较时，可以选用Fura-2AM；但它需要紫外激发，光毒性和设备门槛高于Fluo-4。

普通细胞系、原代细胞、脑片或**刺激下的Ca²⁺波动记录实验，Fluo-4AM通常是**。在单波长Ca²⁺指示剂中Fluo-4应用非常广泛，其吸收峰约490nm、发射约520nm，非常适合488nm激光和FITC/GFP通道。Fluo-4是Fluo-3的类似物，488nm激发效率更高，因此在共聚焦、流式和微孔板筛选中信号更强。

在做急性刺激实验、**筛选、普通共聚焦或宽场成像时，Fluo-4AM是稳妥且常用的选择。如下图A所示。

在神经科学、行为学、体内双光子、光纤记录和长期成像中，*常用的已不是化学染料，而是基因编码钙指示剂GCaMP系列。GECI如GCaMP可用于体内和转基因动物，并能在复杂神经网络中进行单细胞水平和特定细胞类型的Ca²⁺研究。GCaMP6家族为常用Ca²⁺reporter，按动力学分为fast、medium和slow类型。体内神经钙成像、光纤记录和长期记录优先选GCaMP6s/6f。GCaMP6s更偏高灵敏度、慢动力学；GCaMP6f和jGCaMP8f更适合快速事件；

如果追求更快动力学和更好的单spike检测，jGCaMP8系列应优先考虑。jGCaMP8s在灵敏度和动力学上相对GECI有多项改进；同时GCaMP8s适合弱信号和单spike检测。

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