BTX电转仪---- 领导CRISPR实验

什么是CRISPR?

CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats), 是**中用于与病毒进行斗争的**武器。 生命进化历史上,**为了将病毒的外来入侵基因**,进化出CRISPR系统,利用这个系统,**可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除,这是**特有的**系统。这种切除功能其中比较典型的模式是依靠一个复合物,该复合物能在一段RNA指导下,定向寻找目标DNA序列(图1),并招募一个蛋白(如Cas9)(图2),Cas9能够将该序列进行切除(图3)。正是基于**的这种后天**防御机制,CRISPR/Cas9技术应运而生,从而使科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶实现对多种细胞基因组的特定位点(如 NHEJ非同源性末端接合) (图四4)进行修饰。

为什么要电转?
CRISPR**已经开始,将CRISPR结构导入特定细胞 (如干细胞、神经细胞、造血细胞、受精卵,等等)用普通地方法旺旺很困难。电穿孔技术可使这些细胞在**的电脉冲作用下,在细胞膜上形成瞬时的空隙,从而诱导CRISPR结构通过这些空隙进入细胞中。在电脉冲撤离后,细胞恢复原有状态,这种物理学的方式并不影响细胞内部任何代谢及生理变化。



BTX电转和CRISPR
外源物质如何高效的进入目的细胞是进行表达修饰实验(CRISPR、基因编辑、基因工程)成功的关键。BTX电穿孔系统由于它的易用性、重复性、高效率和低毒性,已经成为将CRISPR结构导入细胞(如哺乳动物细胞、**、酵母、植物、寄生虫等)的重要手段。

使用BTX系统进行多种类型转染体外培养--贴壁细胞、悬浮细胞及原代细胞·在体·在卵内·在**内·离体

使用BTX系统可转染CRISPR到多种细胞,包括很多难转染的细胞
神经细胞 • 原代细胞 • **细胞 • 胚胎细胞 • 受精卵 • 寄生细胞

Why BTX?




使用新的卵母细胞电极进行卵母细胞/胚胎电转


卵母细胞电极:

可用于高通量小鼠卵母细胞、受精卵或者胚胎的CRISPR/Cas9基因编辑
易于使用,快速,高通量
每次可以操作20 – 40 个卵母细胞
电转过程可视
容易收集电转后所有的胚胎细胞



使用BTX电转仪将 CRISPR/Cas9 质粒转染进难转染的细胞例如Taxoplasma gondii

 A) 在Taxoplasma gondii 细胞中,CRISPR 质粒 (pU6-SAG1)切断SAG1 位点

B) 成功转染的细胞 (绿色) 与 模拟(mock) 转染细胞比较

来源: Efficient Genome Engineering of Toxoplasma gondii using CRISPR/Cas9 Sidik SM, et al., 2014Plos One, volume 9, Issue 6, July 2014




需求留言

您对我们的产品有任何需求?

欢迎留言给我们

Copyright@ 2003-2024  东乐自然基因版权所有  
电话:010-62257793/62259284/62222251   地址:北京市海淀区西直门北大街32号枫蓝国际B座1710
       京ICP备11044483号-8     
客服
关注微信公众号

京公网安备 11010802025924号